Técnica de Contagem de MICROALGAS

Material Necessário:


Tubo de plático
Pipeta
Amostra de algas
Iodo
Câmara de Fuchs Rosenthal ou similar
Lâminula
Microscópio optico
Contador

Procedimento:

Retira-se com a pipeta cerca de 5 ml de amostra de água com cianobactéria e coloca no tubo de plástico, tudo autoclavado. Adiciona 2 gotas de Iodo na amostra para fixação através das paredes de amido, a cor da agua passará a ser conhaque. Deixar fixar por cerca de 15 minutos.

Com a pipeta colocar na câmara de Fuchs Rosenthal a amostra até completar a forma em H da câmara, colocar a lâminula deixar sedimentar por 10 minutos.

Observar a forma de H eo local onde pipeta-se a amostra

Caso haja formação de grumos (colônias de Células) colocar NaOH antes de colocar na câmara de Fuchs Rosenthal para aumentar o Ph.
Levar ao microscópio optico e observar os quadradinhos da câmara começar a contagem pelo primeiro quadradinho. Observando que:

•  Se a presença de muitas cianobactérias basta contá-las em quadradinhos diagonais, contando até mais ou menos 400 algas. Considerando sempre em quantos quadradinhos estavem todos no total. 

Observar a disposição das contagens em diagonal

Se poucas células presentes basta contá-las em linha reta, até também mais ou menos 400 células.
Observação: Quando as algas estiverem sofrendo mitose considere uma só espécie.

Após a contagem fazer os seguintes cálculos:

Total de células contadas dividido pela quantidade de quadrinhos = X

X vezes 80.000 (confira as informações abaixo quanto a esse número) = Y (sendo Y a quantidade de Células por ml)

Comentários

A câmara de Fuchs Rosenthal é um aprelho chamada Hemocitômetro que consiste numa lâmina grossa de vidro o´ptico especial de alta transparência. As áreas de Conatgem tem Forma de H. Os hemocitômetros mais usados para contagem de algas é o de Neubauer e Fuchs Rosenthal.
O hemocitômetro de Rosenthal possui 16 quadrados de 1.0 mm ( área de 1.0 mílimetro quadrado), cada quadrado possui 16 subdivisões menores, o que no total dar-se 256 quadradinhos. A câmara possui 0.2 mm de profundidade e volume total de 3.2 milímetros cúbicos.

Camara de contagem

Ao fazer a contagem deve-se considerar o seguinte:

Conta-se somente os quadrados grandes sendo que para cada quadrado contado o valor a ser multiplicado será:

Se 16 quadrdos contados = 310
Se 08 quadrados contados = 625
Se 04 quadrados contados = 1.250
Se 01 quadrados contados = 5.000
Se 1/2 quadrados contados = 10.000 ( equivale 8 subdivisões)
Se 1/8quadrados contados = 40.000 (equivale 2 subdivisões)
Se 1/16 quadrados contados = 80.000 (equivale 1 subdivisão)

Considera-se também as células contidas nas bordas de cada quadrado. Observe a imagem:

Os métodos de concentração mais usados para preparar a amostra é a centrifugação e a sedimentação. Quando em microscópio comum usa-se centrifugação, quando em microscópio invertido usa-se a sedimentação. Considerando que a sedimentação é a mais recomendada uma vez que não altera e nem rompi as células a serem observadas.